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Exosome临床样本实验设计

Exosome临床样本研究实验设计和正常对照

  SummayExosome 临床样本取样正确与否直接关系到下游实验检测。很多因素会影响样本质量,需要格外注意。
 

Study design and normative controls

  三种实验分别需要不同水平的对照和流程。需要根据研究的问题设定流程。
  a.科研类实验需要研究Exosome的数量,大小,exRNA cargo,蛋白质组,脂质组学,代谢组学,糖原组学和其他的体液特征。尤其在筛选exosome的亚群的分子标记,或者通过大小结构电荷分离,需要注意实验应具有重复性。比如应减少血小板和中性白细胞来源的exosome
  b.诊断类实验是需要研究疾病进程与biormarker特异性和数量相关性特征。为了验证特异性和检测Marker的相关性,在exosome分离时必须要检测特定的临床病理体液样本。与目前的诊断手段相比,这类研究,能够提高检验敏感性,减少费用或降低发病率。
  c.制备类实验是为病人制备exosome的研究。这需要最高水平的标准,即需要保留exosome的功能,还需要纯化的exosome
   Normative controls
  对照组应该与病人(性别,年龄等相符),另外还有很多因素都与exosome的分泌有关,包括年龄、性别、种族、体重系数 (body mass indexBMI) 和用药(比如口服避孕药)。另外,女性还需要考虑怀孕与否,是否多胎妊娠等。空腹和餐后状态影响血浆脂蛋白和exosome的水平。另外,患病如感冒也应该考虑,因为急性感染会影响circulating cells  RNA。样本采集前是否进行体育锻炼,是否进行过肝素治疗应该考虑,因为会影响下游PCR反应,影响exosome与受体细胞的结合。
 

Q:同一样本的进行多次重复检测是否可以用来做计算样本间差异(individual differences)?

A:不可以。同一样本取样后分装,可以用来验证exosome的分离效果,RNA提取和后续检测的操作差异性;或者从同一样本多个时间点取样可以用来检测特定exosome marker的时间差异性。但是还有一种情况就是,同一癌症病人手术前样本,和手术后的样本是可以配对的,或者感染前和感染后的同一样本,可以配对比较。

 

 

总结:样本收集和处理需要注意事项  A proposed checklist for sample collection and processing

  年龄Age

性别Sex

种族Race/ethnicity

女性:怀孕、妊娠、排卵周期、绝经期。Females: any current pregnancy, gravidity, ovulatory cycle and menopause state

住院(目前)Hospitalization (recent)

抗凝治疗Prior or current anticoagulant treatment or coagulo-pathy

肝素治疗Heparin therapy

肝素类似物Heparinoids

阿司匹林Aspirin

外周静脉凝血疾病,肺(肺栓塞)Known clotting disorder of peripheral veins, lung(pulmonary embolus)

目前用药清单Current medication list (Including but not limited to birth control)

抽烟?Smoker?

滥用药物?Drugs of abuse?

每周运动情况Physical activity-each week

每天工作或家庭活动    Daily job or home activities

坚持体育锻炼<每周3h  Dedicated physical activity <3 h per week

坚持体育锻炼>每周3h  Physical activity>3 h per week

 

睡眠情况Sleep pattern (e.g. night shift worker/sleep distur-bances)

最后的饮食、饮水情况Last food and fluid intake

             其他饮食因素Additional dietary details if possible


 
 
 
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